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Wenn die Adsorptionskraft fr einen bestimmten Stoff zu gro wird und er nicht mehr mit der mobilen Phase weiterwandern kann, setzt sich der Stoff ab und es bildet sich ein Fleck dieses Stoffes auf einer bestimmten Hhe. Auf diese Weise kann man Farbstoffgemische auftrennen und zeigen, dass eine scheinbar einfarbige Lsung aus vielen verschiedenfarbigen Komponenten besteht. Substanzen ohne sichtbaren Farbstoff knnen unter UV-Licht sichtbar gemacht werden. Versuch 4: Trennung von Blattfarbstoffen Um die Rohchlorophylllsung zu erhalten, schneidet man frische Bltter klein, gibt Quarzsand und Kalk (CaCO3) dazu und zerreibt sie unter Zusatz von etwa 10ml Aceton (C3H6O) gut mit einem Mrser in einer Reibschale. Anschlieend wird die Substanz filtriert und man erhlt eine grne Rohchlorophylllsung. (Die Lsung sollte ber ein krftiges dunkles Grn verfgen) Danach wird das Fliemittel vorbereitet. Es besteht aus 5ml Benzin, 5ml Petrolther und 1ml Propanol-2. Dünnschichtchromatographie · Prinzip & Auswertung · [mit Video]. Das Laufmittel wird letztlich nur noch durchgeschwenkt.
Dafür misst man auf dem Chromatogramm jeweils wie weit sich die einzelnen Bestandteile der Probe von der Startlinie weg bewegt haben. Diese Längen setzt man dann jeweils ins Verhältnis zu der Wegstrecke, die das Laufmittel von der Startlinie aus zurückgelegt hat. Dünnschichtchromatographie blattfarbstoffe rf wert 6. Dadurch ergibt sich der jeweilige -Faktor: = Laufstrecke Substanz; = Laufstrecke Laufmittel Durch diesen -Wert, auch Retentionsfaktor genannt, stellt man Vergleichbarkeit zwischen den Ergebnissen verschiedener Dünnschichtchromatogrammen her, da dieser Wert bei gleicher Wahl der Zusammensetzung der mobilen Phase und der stationären Phase eine für jeden Stoff spezifische Konstante ist. Über diesen -Wert kann man die einzelnen Bestandteile durch Vergleiche mit einer Referenz auch identifizieren. Dünnschichtchromatographie Rst-Faktor Oftmals wird für eine exaktere Bestimmung auch der -Wert statt dem -Wert herangezogen. Dieser setzt die Laufstrecke der Substanzen der Proben ins Verhältnis zur Laufstrecke, die das reine Laufmittel ohne Probe gehabt hätte.
Dieser Transmissionswert wird mit Hilfe einer, vorher erstellten, Kalibriergerade einer Stammlösung bekannter Konzentration, in den Carotingehalt des Extraktes umgerechnet. Herstellung der Chelate: Die Lösungen der zu bestimmenden Ionen werden mit 1ml Natrium-Diethylcarbaminat-Lösung versetzt. Dünnschichtchromatographie - Blattfarbstoffe / Metallchelate - GRIN. Die ausgefallenen Komplexe werden mit Chloroform im Scheidetrichter extrahiert, und in verschließbare Gläschen überführt. Trennung: Analog der Blattfarbstofftrennung Aktivität: Hier wird die Bestimmung nach Brockmann-Schodder durchgeführt. Dazu verwendet man verschieden behandelte Platten: 1: Platte im Wasserdampfgesättigten Raum 2: Luftfeuchte Platte 3: 30min Trockenschrank 30min Laborluft 4: 30min Trockenschrank Als Laufmittel verwendet man Tetrachlorkohlenstoff, und als zu trennende Substanzen Azobenzol, 4-Methoxyazobenzol, Sudanrot und 4-Aminoazobenzol. Die so erhaltenen Rf-Werte werden mit einer Tabelle verglichen, und somit der Wassergehalt bestimmt. swertung Blattfarbstoffe Abhängigkeit von der Laufmittelzusammensetzung: Diagramme: Diskussion: Der Theorie nach, müssten bei steigender Polarität, auch die Rf-Werte ansteigen.
Grünes Chlorophyll wird im Herbst tiefer im Stamm eingelagert, orange und rote Carotinoide bzw. Xantophylle kommen dann zum Vorschein. Video
Im Falle einer zu geringen Geschwindigkeit setzt das Problem der schon erwähnten Diffusion ein, wie bei zu langen Trennstrecken. Bei zu hoher Geschwindigkeit finden nicht genug Wechsel zwischen flüssiger und adsorbierter Phase für jedes Teilchen statt, um statistische Ausreißer auszuschließen. Denn die Verweildauer in einer der beiden Phasen für die Teilchen variiert und somit würden sich bei zu großen Geschwindigkeiten der mobilen Phase zu hohe Standardabweichungen für das Ergebnis ergeben. Dünnschichtchromatographie Auswertung im Video zur Stelle im Video springen (03:14) Idealerweise kann man am Ende der Durchführung der Dünnschichtchromatographie die einzelnen Bestandteile der Probe als getrennte Punkte erkennen. Falls sie unter UV-Licht nicht erscheinen, kann man die Probe auch mit Chromophoren derivatisieren, durch die sie eine mit dem Auge sichtbare Farbe erhält. Dnnschicht-Chromatografie - Referat, Hausaufgabe, Hausarbeit. Dünnschichtchromatographie Auswertung Dünnschichtchromatographie Rf-Wert Im nächsten Schritt möchte man nun die einzelnen Bestandteile der Probe identifizieren.